蛋白的等电点与其氨基酸序列和三维结构密切相关，特定蛋白的等电点是固定的，因此可以通过比较不同蛋白质的等电点来研究它们的结构和功能差异，精确测定等电点是生物制品电荷异质性表征的重要一环。

基于毛细管等电聚焦（cIEF）原理进行蛋白等电点分析是生物制品等电点检测中最常使用的方法。该微分离技术的基本原理是在毛细管两端加上直流电压，管内的载体两性电解质可以形成一定范围的pH梯度，蛋白质依据其所带电荷向阳极或阴极移动，直到净电荷为0的某个pH值（即等电点pI）时停止，最终蛋白质聚焦成很窄的区段，从而达到分离的目的，并获得该蛋白质的等电点信息。

基于cIEF进行蛋白等电点检测，分析时间短、分辨率高、重复性好、精确度高、样本用量少，已经成为多种氨基酸、多肽、重组蛋白、抗体及疫苗等生物制品研发与质量控制中的关键技术之一。

百泰派克生物科技BTP通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证；公司参照《中华人民共和国药典》2020年版三部通则0542/四部通则0542毛细管电泳法，根据cIEF原理，建立了针对于不同类别生物制品的蛋白等电点检测平台，可实现蛋白、抗体、疫苗、多肽、重组胶原蛋白等生物制品等电点的精确测定，也可以提供完整的包含方法学建立、验证以及后续样品检测的整体服务。BTP还提供其他生物制品表征相关的服务，可点击了解详情。

实验仪器

• BECKMAN COULTER PA800+毛细管电泳仪

技术应用

cIEF具有分析时间短，分辨率高、重复性好、精确度高、样本用量少等优点。该方法已经成为多种氨基酸、多肽、重组蛋白、抗体、疫苗等生物制品研发与质量控制中的关键技术之一。

案例示意

实验过程中，将样品与两性电解质及5种标准的pI Marker混合，使用毛细管电泳仪检测，在毛细管中电泳聚焦，根据5种内标的保留时间，计算出供试品等电点。

图1 pI marker结果

图2 单抗样品检测结果

常见问答

问题1：为什么多数蛋白质的等电点是中性偏酸性？

回答：蛋白质是由氨基酸组成的，而大多数氨基酸等电点小于人体的pH（pH=7.4），故而大多数的蛋白质的等电点偏酸性，如山羊胃蛋白酶等电点约为3。

问题2：有没有等电点偏碱性的蛋白质？

回答：存在pI碱性的蛋白质。当蛋白质中的碱性氨基酸，如组氨酸，精氨酸、赖氨酸、比列较大，会导致等电点偏碱性，如鱼精蛋白等电点约为12。

问题3：做等电点检测，两种检测方法如何选择？

回答：基于cIEF的等电点检测需要样品具有280nm的紫外吸收；不具有280nm的紫外吸收的样品（例如胶原蛋白）进行基于IEF的等电点检测。

基于cIEF的蛋白等电点分析一站式服务

您只需下单-寄送样品

百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

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